產(chǎn)品名稱：霍亂弧菌01和0139群熒光PCR檢測(cè)試劑盒

貨號(hào)：BH-P64477
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性高。
3. 提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。

實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（*好用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
6. 換槍頭，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見下步），每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
Ai-phospho-JNK1/2(pThr183/pTyr185)/FITC 熒光su標(biāo)記抗磷suan化氨基末端激mei1/2抗體IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rabbit Ai-human IgM/Gold 金標(biāo)記兔抗人IgM (10nm/15nm)Multi-class aibodies： 0.5ml

Fe65 蛋白抗體 Ai-Fe65 protein 0.2ml

Rabbit Ai-Guinea pig IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM 0.1ml

FOXD1 英文名稱： 叉頭蛋白D1抗體 0.2ml

Rhesus aibody Rh phospho-SYN1(Ser62+Ser67) 磷suan化神經(jīng)突觸su1抗體  0.1ml

Rabbit Ai-human IgM/Gold 金標(biāo)記兔抗人IgM (10nm/15nm)Multi-class aibodies： 0.5ml

MGr1-Ag/37LRP(P37-kDa laminin receptor precursor) 層粘連蛋白受體1抗體Multi-class aibodies： 0.5mg

Ai-beta-Amyloid(1-28) β淀粉樣肽(1-28)抗體Multi-class aibodies： 0.1ml

Rhesus aibody Rh Phospho-BLNK(Tyr491) 磷suan化T細(xì)胞連接蛋白抗體  0.1ml

多聚賴suan溶液0.1%(Poly-L-Lysine)10X 10ml 組化用

Vimein 英文名稱： 波形蛋白抗體 0.1ml

DNAH7 英文名稱： 軸絲動(dòng)力蛋白7抗體 0.2ml

Ai-beta-Amyloid(1-28) β淀粉樣肽(1-28)抗體Multi-class aibodies： 0.1ml

mSin3A 英文名稱： 同源轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白Sin3A抗體 0.2ml

EPOR 英文名稱： 紅細(xì)胞**su受體抗體 0.1ml

新的抑癌基因Brg1抗體 Ai-Brg1 0.1ml

Ai- Beta-Actin/HRP 辣根過氧化物mei標(biāo)記β-肌動(dòng)蛋白(抗體)Multi-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh phospho-IFNAR1(Ser535+Ser539) 磷suan化干擾suα受體抗體  0.1ml

Cav-1/ETM1 peptide 細(xì)胞質(zhì)膜微囊蛋白-1抗原Multi-class aibodies： 0.5mg

霍亂弧菌01和0139群熒光PCR檢測(cè)試劑盒D-葡糖糖-6-磷suan二鈉二水克拉維suan3’端銜接體（LINKER）連接試劑盒

亞硫suan氫鈉(AR)舒巴坦適配體（ADAPTER）連接試劑盒

丁二suan鈉(AR)羥氨芐鈣轉(zhuǎn)試劑盒

氯化銅二水(AR)林可霉su通用型CHIP DNA分子克隆試劑盒

牛血紅蛋白甲砜霉su通用型CHIP DNA分子庫構(gòu)建試劑盒

乙suan鈉雙氫苯甘氨suan高效CHIP DNA分子克隆試劑盒

聚乙二10000α-對(duì)羥基苯甘氨suan高效CHIP DNA分子庫構(gòu)建試劑盒

DL-蘋果suan氯霉su二物10倍PCR完全緩沖液

注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。