服務流程： 

（1）客戶提供：目的細胞具體信息；

（2）操作過程：細胞復蘇培養(yǎng)，細胞發(fā)貨；

（3）交付內(nèi)容：細胞系/細胞株，以及細胞使用說明書。

英文簡稱：AML-193細胞

產(chǎn)品名稱： 急性單核細胞白血病單核細胞

規(guī)格：T25

形態(tài)特性： 母細胞

生長特性：懸浮生長

特征特性：

培養(yǎng)條件：IMDM+ 0.005 mg/ml insulin+ 0.005 mg/ml transferrin + 5 ng/ml GM-CSF, 95%+ 5%FBS.

傳代方法：1:2。3天內(nèi)可長滿。

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時； 

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。 

實驗要點及說明 ：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應該為玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率； 

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時（4h左右），穩(wěn)定細胞狀態(tài)，切忌在溫箱內(nèi)靜置過夜。

3. 靜置后鏡檢，拍照，記錄細胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況。

4. 貼壁細胞：若細胞密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，收集細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基，留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代，瓶蓋可稍微擰松。

5. 細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗，可收集后4℃保存?zhèn)溆茫裳a加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基，一半用客戶自備的培養(yǎng)基，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件，以免因不適應而造成生長狀態(tài)不佳。

6. 細胞胰酶消化液建議使用PBS配制，

7. 因為細胞培養(yǎng)過程外因太多，所以我們的售后保障期為一周，超過一周的細胞我們會酌情處理，但不提供免費更換服務。 細胞運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

硫代草氨酸乙酯Ethyl Thiooxamate,95%16982-21-11G

2-溴噻唑-4-甲酸乙酯Ethyl 2-Bromothiazole-4-carboxylate,96%100367-77-91G

L-蘋果酸二甲酯Dimethyl L-(-)-Malate,98%617-55-05G

硝基乙酸甲酯Methyl Nitroacetate,98%2483-57-01G

3-氨基巴豆酸甲酯3-Aminocrotonic Acid Methyl Ester,97%14205-39-1100G

4-氰基苯甲酸甲酯Methyl 4-cyanobenzoate,99%1129-35-75G

6-喹喔啉甲酸甲酯Methyl 6-quinoxalinecarboxylate,97%23088-23-51G

3,3-二甲基丙烯酸甲酯Methyl 3,3-Dimethylacrylate,97%924-50-55G

硫代草氨酸乙酯Ethyl Thiooxamate,95%16982-21-11G

2-溴噻唑-4-甲酸乙酯Ethyl 2-Bromothiazole-4-carboxylate,96%100367-77-91G

L-蘋果酸二甲酯Dimethyl L-(-)-Malate,98%617-55-05G

硝基乙酸甲酯Methyl Nitroacetate,98%2483-57-01G

急性單核細胞白血病單核細胞ellow Fever Virus(YFV)黃熱病病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周

Histoplasm farcinimosum馬皮疽組織胞漿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周

Rhizoma dioscoreae山藥PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周

Mycobacterium malmoenes瑪爾摩分枝桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周

Bulbus fritillariae cirrhosae川貝母LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周

鴿子源性成分LAMP試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周

Salmonella typhi傷寒沙門氏探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周

Iris Yellow Spot Virus(IYSV)鳶尾黃斑病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周

Chikungunya Virus(CHIKV)基孔肯尼雅病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周

芥末源性成分LAMP試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周

Porcine Epidemic Diarrhea Virus(PEDV)豬流行性腹瀉病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周

Radix euphorbiae pekinensis京大戟探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周

Candidatus Liberibacter asiaticus柑橘黃龍病亞洲種PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-3周

操作流程：

1、您收到母細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml完全培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，*后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細胞完全貼壁后，觀察培養(yǎng)結果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。 

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。