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產(chǎn)品詳情
  • 產(chǎn)品名稱:大鼠頸動脈內(nèi)皮細胞

  • 產(chǎn)品型號:BH-8010838
  • 產(chǎn)品**:派瑞曼
  • 產(chǎn)品文檔:
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簡單介紹:
大鼠頸動脈內(nèi)皮細胞在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
詳情介紹:

服務(wù)流程: 

1)客戶提供:目的細胞具體信息;

2)操作過程:細胞復(fù)蘇培養(yǎng),細胞發(fā)貨;

3)交付內(nèi)容:細胞系/細胞株,以及細胞使用說明書。

產(chǎn)品名稱

大鼠頸動脈內(nèi)皮細胞

規(guī)格

詳見說明書

貨號

BH-8010838

培養(yǎng)操作步驟

1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時; 

4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中; 

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學(xué)檢測。 


實驗要點及說明

1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法; 

2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 

3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 

4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率; 

5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。


注意事項:

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時(4h左右),穩(wěn)定細胞狀態(tài),切忌在溫箱內(nèi)靜置過夜。

3. 靜置后鏡檢,拍照,記錄細胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況。

4. 貼壁細胞:若細胞密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,收集細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代,瓶蓋可稍微擰松。

5. 細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗,可收集后4℃保存?zhèn)溆?,可補加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,一半用客戶自備的培養(yǎng)基,使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件,以免因不適應(yīng)而造成生長狀態(tài)不佳。

6. 細胞胰酶消化液建議使用PBS配制,

7. 因為細胞培養(yǎng)過程外因太多,所以我們的售后保障期為一周,超過一周的細胞我們會酌情處理,但不提供免費更換服務(wù)。 細胞運輸和保存:可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存方式:(1)干冰運輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇;收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

DNA電泳分子量標準系列(DNA marker)(250-15000bp) 大腸桿TB1感受態(tài)細胞

pPT150 pSP73(60908-6300)y

Bis-Tris Propane,0.2M,pH8.0 Kinase Buffer VI,5X

大鼠一氧化氮合成酶(NOS)ELISA Kit 人8-異構(gòu)前列腺素F2α(8-epi-PGF2α)ELISA Kit

Marine broth (anaerob) Neomycin agar

pcDNA3.1/Zeo(-)(pcDNA3.1Zeo)(60908-1570) Sporolituus medium

人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit pEG202

柱式BAC DNAout 小鼠肝脂酶(HL)ELISA Kit

pOPI3CAT(60908-5240) SSC溶液,20×

Loyez 蘇木素染色法神經(jīng)組織染色試劑盒 pPZP222

大鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA Kit pMCSG70 (linearized)

Cytophaga hutchinsonii medium DNAHEPES溶液,1M,pH7.3

pAP1(PMA)-TA-Luc(pAP1PMATALuc)(60908-520) 猴載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA Kit

大鼠頸動脈內(nèi)皮細胞阿米卡星雜質(zhì)A 英文名稱:Amikacin impurity A 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光

磷霉素氨丁三 英文名稱:Fosfomycin ammonia butyl alcohol three 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光

美洛西林鈉 英文名稱:Mezlocillin sodium 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光

卡那霉素B 英文名稱:Kanamycin B 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光

加替沙星 英文名稱:Gatifloxacin hydrochloride 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光

利福昔明 英文名稱:Rifaximin 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光

利福噴丁 英文名稱:Rifapentine 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光

利福霉素B 英文名稱:Rifamycin B 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光

利福霉素S 英文名稱:Rifamycin S 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光

7-ACA(7-氨基頭孢烷酸) 英文名稱:7 - ACA (7- amino cephalosporanic acid) 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光

左氧氟沙星 英文名稱:Levofloxacin hydrochloride 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光

操作流程:

1、您收到母細胞后,請按照以下方法進行操作:

取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài),然后換用新鮮完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

2、細胞傳代:

1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3)棄上清,沉淀細胞用12ml完全培養(yǎng)基重懸,然后按1:2比例進行分瓶傳代,*后放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

4)待細胞完全貼壁后,觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細胞凍存:

1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3)用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細胞,并放置于凍存管中;

4)先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。 

4、細胞復(fù)蘇:

1)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2)將凍存管中的細胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中, 1000rpm離心5min;

3)棄上清,沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸,接種25cm2培養(yǎng)瓶,于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

4)換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

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