服務(wù)流程： 

（1）客戶提供：目的細(xì)胞具體信息；

（2）操作過(guò)程：細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)，細(xì)胞發(fā)貨；

（3）交付內(nèi)容：細(xì)胞系/細(xì)胞株，以及細(xì)胞使用說(shuō)明書(shū)。

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明 ：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時(shí)（4h左右），穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，切忌在溫箱內(nèi)靜置過(guò)夜。

3. 靜置后鏡檢，拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

4. 貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，收集細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代，瓶蓋可稍微擰松。

5. 細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗，可收集后4℃保存?zhèn)溆?，可補(bǔ)加2%血清。剛開(kāi)始傳代時(shí)建議一半用細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，一半用客戶自備的培養(yǎng)基，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件，以免因不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)狀態(tài)不佳。

6. 細(xì)胞胰酶消化液建議使用PBS配制，

7. 因?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)過(guò)程外因太多，所以我們的售后保障期為一周，超過(guò)一周的細(xì)胞我們會(huì)酌情處理，但不提供免費(fèi)更換服務(wù)。 細(xì)胞運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存方式：（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

pAc5.1/V5-His /LacZ(pAc5.1V5HisLacZ) (60908-289)　人抗酒石酸酸磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA Kit

人骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA Kit　Ca Ski [CaSki]細(xì)胞株

總谷胱甘肽過(guò)氧化物酶檢測(cè)試劑盒 pGL4.27[luc2P minP Hygro]（60908-3981）

pLKC480　豬血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA Kit

維生素B12　L-谷胱甘肽(還原型)

馬腺疫鏈球PCR檢測(cè)試劑盒　pTagRFP-C（pTagRFPC）

YEp24　TE Buffer,100X,pH7.4

L3505　人低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA Kit

人磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)ELISA Kit　Thermotoga petrophila medium

Jurkat D細(xì)胞株　pET-50b(+)(pET50b)（60908-2817）

pHS85　小鼠末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA Kit

N-乙酰-L-半胱氨酸　大腸桿TOP10感受態(tài)細(xì)胞

SDS-PAGE上樣液5×（10 mL）　pSpark III (linearized)

大鼠甲狀腺成纖維細(xì)胞酪蛋白 英文名稱(chēng)：Casein 規(guī)格：：7g/瓶 保存：：-20℃，避光

乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基 英文名稱(chēng)：Lactose fermentation medium 規(guī)格：：3.0g /100mL，20袋/盒 保存：：-20℃，避光

四酸鈉亮綠對(duì)照培養(yǎng)基基礎(chǔ) 英文名稱(chēng)：Four sulfonic acid sodium light green contrast medium base 規(guī)格：：4.5g/100ml 保存：：-20℃，避光

溴化十六烷基三瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基 英文名稱(chēng)：Sixteen alkyl trimethyl amine bromide agar control medium 規(guī)格：：13.6g /300mL，20袋/盒 保存：：-20℃，避光

哥倫比亞瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基 英文名稱(chēng)：The control Columbia agar culture medium 規(guī)格：：13.2g/300ml 保存：：-20℃，避光

綠膿素測(cè)定用對(duì)照培養(yǎng)基基礎(chǔ) 英文名稱(chēng)：Pyocyanin determined by contrast medium base 規(guī)格：：13.9g/300ml 保存：：-20℃，避光

顯色對(duì)照培養(yǎng)基 英文名稱(chēng)：Candida color contrast medium 規(guī)格：：4.8g/100ml 保存：：-20℃，避光

沙氏葡萄糖瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基 英文名稱(chēng)：Sabouraud dextrose agar control medium 規(guī)格：：19.5g/300ml 保存：：-20℃，避光

沙門(mén)、志賀屬瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基 英文名稱(chēng)：Salmonella, Shigella Agar control medium 規(guī)格：：18.0g/300ml 保存：：-20℃，避光

麥康凱瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基 英文名稱(chēng)：Mark Kang Kai agar control medium 規(guī)格：：15.6g/100ml 保存：：-20℃，避光

款冬酮 英文名稱(chēng)：Kuan Dongtong 規(guī)格：：20mg 保存：：-20℃，避光

操作流程：

1、您收到母細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。

2、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用12ml完全培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，*后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細(xì)胞完全貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過(guò)夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。 

4、細(xì)胞復(fù)蘇：

1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無(wú)結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。