服務(wù)流程： 

（1）客戶提供：目的細(xì)胞具體信息；

（2）操作過程：細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)，細(xì)胞發(fā)貨；

（3）交付內(nèi)容：細(xì)胞系/細(xì)胞株，以及細(xì)胞使用說明書。

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測。 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明 ：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時(shí)（4h左右），穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，切忌在溫箱內(nèi)靜置過夜。

3. 靜置后鏡檢，拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細(xì)胞生長情況。

4. 貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，收集細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基，留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代，瓶蓋可稍微擰松。

5. 細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗，可收集后4℃保存?zhèn)溆?，可補(bǔ)加2%血清。剛開始傳代時(shí)建議一半用細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基，一半用客戶自備的培養(yǎng)基，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件，以免因不適應(yīng)而造成生長狀態(tài)不佳。

6. 細(xì)胞胰酶消化液建議使用PBS配制，

7. 因?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)過程外因太多，所以我們的售后保障期為一周，超過一周的細(xì)胞我們會(huì)酌情處理，但不提供免費(fèi)更換服務(wù)。 細(xì)胞運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存方式：（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

α-淀粉酶　人基質(zhì)裂解素(ST1)ELISA Kit

非變蛋白電泳分子量標(biāo)準(zhǔn)（蛋白Marker）　柱式植物DNAout

pUCD4　pLVX-MetLuc Reporter

Phosphate Buffered Saline（PBS，磷酸緩沖鹽水）,20x, pH 7.4　直鏈淀粉

人肌抑素(MSTN)ELISA Kit　人巨細(xì)胞病毒PCR檢測試劑盒

大腸桿ER2529種　ZsGreen

pFL45S　lac promoter

小鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA Kit　人尿蛋白(UP)ELISA Kit

SuperTOPO-Kan通用克隆試劑盒（SuperTOPO三劍客）　MuM-2B [MuM2B]細(xì)胞株

pTRE-Dual1(pTREDual1)　pINT3

POPSO Buffer，0.2M,pH8.0　碘代乙酰胺

人白介素12(IL-12/P40)ELISA Kit　α-Tubulin小鼠單抗（1000 μL）

Sea water yeast peptone medium　YCpIF1

大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞維生素B2 英文: VB2 CAS號(hào): 83-88-5  

5-核黃素磷酸鈉鹽 英文: FMN-Na CAS號(hào): 130-40-5  

5-核黃素磷酸鈉鹽二水物 英文: FMN-Na CAS號(hào): 6184-17-4  

維生素B3 英文: VB3 CAS號(hào): 59-67-6  

異煙酸 英文: COA CAS號(hào): 55-22-1  

維生素B5 英文: VB5 CAS號(hào): 137-08-6  

維生素B6 英文: VB6 CAS號(hào): 58-56-0  

維生素B12 英文: VB12 CAS號(hào): 68-19-9  

磷酸吡哆醛 英文: PLP CAS號(hào): 41468-25-1  

鹽酸吡哆胺 英文: Pyridoxamine 2HC1 CAS號(hào): 524-36-7  

煙酸肌醇酯 英文: Inositol niacinate  CAS號(hào): 6556-11-2  

操作流程：

1、您收到母細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。

2、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用12ml完全培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，*后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細(xì)胞完全貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。 

4、細(xì)胞復(fù)蘇：

1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。