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注意事項:
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2. 先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時(4h左右),穩(wěn)定細胞狀態(tài),切忌在溫箱內(nèi)靜置過夜。
3. 靜置后鏡檢,拍照,記錄細胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況。
4. 貼壁細胞:若細胞密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,收集細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代,瓶蓋可稍微擰松。
5. 細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗,可收集后4℃保存?zhèn)溆?,可補加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,一半用客戶自備的培養(yǎng)基,使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件,以免因不適應(yīng)而造成生長狀態(tài)不佳。
6. 細胞胰酶消化液建議使用PBS配制,
7. 因為細胞培養(yǎng)過程外因太多,所以我們的售后保障期為一周,超過一周的細胞我們會酌情處理,但不提供免費更換服務(wù)。 細胞運輸和保存:可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存方式:(1)干冰運輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇;收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
服務(wù)流程:
(1)客戶提供:目的細胞具體信息;
(2)操作過程:細胞復(fù)蘇培養(yǎng),細胞發(fā)貨;
(3)交付內(nèi)容:細胞系/細胞株,以及細胞使用說明書。
產(chǎn)品名稱 |
大鼠NK細胞 |
規(guī)格 |
詳見說明書 |
貨號 |
BH-8010816 |
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學(xué)檢測。
實驗要點及說明 :
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程:
1、您收到母細胞后,請按照以下方法進行操作:
取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài),然后換用新鮮完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。
2、細胞傳代:
1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3)棄上清,沉淀細胞用12ml完全培養(yǎng)基重懸,然后按1:2比例進行分瓶傳代,*后放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)待細胞完全貼壁后,觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細胞凍存:
1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3)用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細胞,并放置于凍存管中;
4)先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
4、細胞復(fù)蘇:
1)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2)將凍存管中的細胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中, 1000rpm離心5min;
3)棄上清,沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸,接種25cm2培養(yǎng)瓶,于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
果糖 pSVK100
軍團16S rRNA基因熒光PCR檢測試劑盒(探針法) MOPS Buffer,0.5M,pH5.5
V50 pCS2+mRFP-N3(V50pCS2mRFPN3) 大鼠腎上腺素能a1A受體(ADRA1A)ELISA Kit
d4EGFP Thauera aromatica medium
人集落激因子(CSF)ELISA Kit pET-29a(+)(pET29a)(60908-2794)y
Rhodovulum visakhum medium 小鼠抗紅細胞抗體(RBC)ELISA Kit
pHIL-D2(pHILD2) 石蠟油,PCR
Guanosine 5′-Triphosphate (GTP),Trisodium(5′-三磷酸鳥苷三鈉) pRB381
His標簽蛋白專用蛋白酶抑制劑 人伴侶蛋白10(CPN10)ELISA Kit
pTriEx-4(pTriEx4) CCC-ESF-1細胞株
RIPA Buffer with Glycerol,2X pGL4.38[luc2P p53 RE Hygro]
人谷氨酸脫氫酶(GDH/GLDH)ELISA Kit 豬胰島素(INS)ELISA Kit
YED medium, salted 包涵體蛋白溶解及復(fù)套裝
大鼠NK細胞2′-脫氧胸苷 英文: 2-dT CAS號: 50-89-5
2′-脫氧胸苷-5′-二磷酸三鈉鹽 英文: dTDP CAS號: 95648-78-5
2′-脫氧尿苷 英文: 2′-dU CAS號: 951-78-0
2′-脫氧尿苷-5′-單磷酸二鈉鹽 英文: dUMP CAS號: 42155-08-8
5-溴-2-脫氧尿苷 英文: 5-BrdU CAS號: 59-14-3
5-溴尿苷 英文: 5-BrU CAS號: 957-75-5
5-溴-2-脫氧胞苷 英文: 5-BrdC CAS號: 1022-79-3
5-碘-2-脫氧胞苷 英文: 5-IDC CAS號: 611-53-0
5-碘-2-脫氧尿苷 英文: 5-IDU CAS號: 54-42-2
2′-疊氮脫氧尿苷 英文: 2′-Azido-2′-deoxyuridine CAS號: 26929-65-7
阿糖尿苷 英文: Uracil 1-β-D-arabinofuranoside CAS號: 3083-77-0