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大腸桿菌PCR檢測試劑盒PCR引物二聚體減除方法

日期:2024-09-03 15:03
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摘要: 大腸桿菌PCR檢測試劑盒PCR引物二聚體減除方法: 如果出現(xiàn)了引物二聚體,有許多方法可以減少或消除反應(yīng)中的引物二聚體。 1、 首先是優(yōu)化熱循環(huán)條件,這主要是提高退火溫度。大多數(shù)情況下,兩步循環(huán) (由 95°C 變性步驟直接進(jìn)入60°C 退火和延伸步驟) 有利于強(qiáng)效擴(kuò)增,因此引物設(shè)計時設(shè)定的成功退火溫度為 60°C。 2、可降低引物濃度,甚至采用不同的正向引物和反向引物的比值也有一定的幫助。大多數(shù)情況下,每條引物的理想終濃度為 200 nM,但如有需要,可將濃度降至 60 nM。 3、鎂的合適濃度一般約為 3 mM...

大腸桿菌PCR檢測試劑盒PCR引物二聚體減除方法

如果出現(xiàn)了引物二聚體,有許多方法可以減少或消除反應(yīng)中的引物二聚體。

1、 首先是優(yōu)化熱循環(huán)條件,這主要是提高退火溫度。大多數(shù)情況下,兩步循環(huán) (由 95°C 變性步驟直接進(jìn)入60°C 退火和延伸步驟) 有利于強(qiáng)效擴(kuò)增,因此引物設(shè)計時設(shè)定的成功退火溫度為 60°C。

2、可降低引物濃度,甚至采用不同的正向引物和反向引物的比值也有一定的幫助。大多數(shù)情況下,每條引物的理想終濃度為 200 nM,但如有需要,可將濃度降至 60 nM。

3、鎂的合適濃度一般約為 3 mM。高于此濃度易形成引物二聚體。

4、如果未對引物形成二聚體的傾向進(jìn)行評估,則應(yīng)補(bǔ)充評估并考慮重新設(shè)計 (如有需要)。通常情況下,使用熱啟動 DNA 聚合酶,并在冰上進(jìn)行反應(yīng)。

5、在理論上,針對同一靶點應(yīng)同時檢測多個引物組。這實際上可以節(jié)省大量時間,因為如果這些引物中的一個能立即發(fā)揮作用,則可以減少花費(fèi)在優(yōu)化過程上的時間。

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