原代分離細胞培養(yǎng)是指從供體內(nèi)取出組織后，經(jīng)機械以及消化分離成單個細胞或單一型細胞群，使之在體外模擬人體生理環(huán)境，在無菌、適當(dāng)溫度和一定的營養(yǎng)條件下，生存、生長和繁殖。原代培養(yǎng)細胞常有不同的細胞成分，生長緩慢，但是更能代表所來源的組織細胞類型和表達組織的特異性特征。利用原代細胞培養(yǎng)做各種實驗，如藥wu 測試、細胞分化及病毒學(xué)方面的試驗效果很好。凍存細胞其操作步驟如下：

1、選對數(shù)增生期細胞(證明無支原體污染)，在凍存前1d換液。

2、按常規(guī)方法把培養(yǎng)細胞制備成懸液，計數(shù)，使細胞密度達5×10^7／ml左右密度，離心，去上清。

3、加入配制好的凍存液（培養(yǎng)液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養(yǎng)液中加入保護劑10％二甲基亞砜(DMSO) 或甘油，可使冰點降低，使細胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細胞外。

4、分裝于無菌凍存管中，每管加1.5m懸液。

5、旋好凍存管并仔細檢查，一定要蓋緊，做好標(biāo)記。

6、凍存：在特殊的儀器或簡易的液氮容器中，按-1℃／min的速度，在30～40min時間內(nèi)，下降到液氮表面，再停30min后，直接投入液氮中。要適當(dāng)掌握下降冷凍速度，過快能影響細胞內(nèi)水分透出，太慢則促進冰晶形成。操作時應(yīng)戴防護眼鏡和手套，以免液氮dong傷。